Імуногістохімічне фарбування є здійснюється за допомогою антитіл, які розпізнають цільовий антиген. Оскільки антитіла є високоспецифічними, антитіло буде зв’язуватися лише з антигеном, що представляє інтерес, у ділянці тканини. The
потім візуалізується за допомогою різних систем виявлення.
1)Первинне антитіло зв'язується зі специфічним антигеном; 2) Комплекс антитіло-антиген утворюється шляхом інкубації з вторинним, ферментно-кон’югованим антитілом; 3) У присутності субстрату та хромогену фермент каталізує для створення кольорових відкладень у місцях зв’язування антитіло-антиген.
Прямий метод ІГХ фарбування – це одноетапний метод. Цей метод полягає у використанні первинного антитіла, яке кон’юговано безпосередньо з міткою, такою як антисироватка, кон’югована з флуоресцеїн ізотіоціанатом (FITC), ферментом або лужним фосфатом.
Виявлення можна здійснити за допомогою візуалізації флуоресценція (флуоресцентні мітки) або хромогенні нерозчинні кінцеві продукти (ферментні мітки). І хромогенний, і флуоресцентний методи виявлення мають унікальні переваги та недоліки та залежать від ваших експериментальних потреб, як описано нижче.
Фарбування гематоксиліном і еозином (H&E) є добре відомим методом у гістопатології. однак, імуногістохімічна (ІГХ) інтерпретація проводиться виключно за допомогою контрфарбування гематоксиліном.
Імуногістохімічне (IHC) фарбування дозволяє 2 широких класи виявлення: 1) хромогенний і 2) флуоресцентний. Для хромогенного виявлення CST рекомендує використовувати системи на основі полімерів, які уникають обмежень системи на основі біотину, а також підвищують чутливість аналізу.
У простій плямі, барвники, які або притягуються зарядом (катіонний барвник, такий як метиленовий синій або кристалічний фіолетовий), або відштовхуються зарядом (аніонний барвник, такий як еозин або чорнило), додаються до мазка. Катіонні барвники зв'язують бактеріальні клітини, що добре видно на світлому фоні.