Як можна уникнути тіл включення? Одним із способів мінімізації утворення ВЗ є знижують швидкість експресії рекомбінантного білка – «Краще менше!». Це може включати зниження температури [5] або зниження концентрації індуктора.
Традиційна стратегія очищення білків від тілець включення складається з чотирьох основних етапів: виділення очищених тілець включення, солюбілізація тілець включення, повторне згортання солюбілізованих білків і очищення повторно згорнутих білків різними хроматографічними методами [55].
Тому перше, що потрібно намагатися уникнути утворення тілець включення, це знизити температуру бактеріальних культур зазвичай між 16°C-20°C і використовувати IPTG у менших концентраціях. Зазвичай скринінг на пілотному рівні з різними концентраціями/температурами IPTG допомагає визначити оптимальні умови.
Зазвичай ви можете визначити, чи є він у тілі включення, оскільки вони не розчиняються в мийному засобі. Білок, пов’язаний з мембраною, повинен змитися, коли ви розчиняєте мембрану. (Проте деякі з них можуть бути в мембрані, а деякі в тілі включення… це не обов’язково має бути те чи інше).
Інші методи, які зменшують схильність білків до агрегації, включають:
- Виконання всіх етапів очищення при 4˚C.
- Зведення до мінімуму обробки зразків.
- Уникнення затримок між етапами очищення.
- Зменшення впливу поверхонь повітря та рідини (наприклад, шляхом уникнення утворення бульбашок)
Лікування/лікування Жодна специфічна фармакологічна терапія не є корисною для спорадичного міозиту з тілець-включеннями. Лікування включає глюкокортикоїди, метотрексат, циклофосфамід, азатіоприн, IVIG [3] і алемтузумаб.